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發(fā)布時間:2025-07-11 點此:75次
你好!這當然是正常的。因為細胞本身有重量,在重力作用下都會進行沉降,這在凍存的時候是不會對細胞產(chǎn)生影響的。細胞凍存一般是:4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,之后放于液氮保存。要注意凍存細胞的配比,中間應加入DMSO防凍劑,注意配比,同時加入胎牛血清(不同細胞比例不同)。
因為蛋白質(zhì)在低溫或較高溫度以及鹽溶液中會析出,產(chǎn)生類似的蛋白沉淀物。
而經(jīng)過熱滅活的血清,沉淀物的形成會顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。除非是在做免疫學研究或培養(yǎng)干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,才推薦做熱滅活。
可以放一個月。需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。
短期儲存在4℃環(huán)境內(nèi)對培養(yǎng)細胞沒有影響。但是反復凍融會對血清中的蛋白物質(zhì)有傷害。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛,小牛血清取自出生10-30天的小牛。
為了保持血清的活性,建議在-5到-30℃的冷凍條件下儲存,對于頻繁使用,可選擇在-20℃長期保存,但請注意,4℃下存儲不應超過一個月。使用時,確保在2-8℃冰箱中緩慢解凍并均勻搖晃,以防止蛋白質(zhì)降解。功能與優(yōu)勢 Gibco澳洲胎牛血清10099141C不僅僅是血清,它提供了一套全面的支持。
HEK-293T細胞是293T(293tsA1609neo)細胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細胞持續(xù)表達SV40抗原,該細胞常用于轉(zhuǎn)染實驗,轉(zhuǎn)染效率較高。
HEK293細胞極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體,且比較容易轉(zhuǎn)染,是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。293細胞的一個衍生株:293T 17的轉(zhuǎn)染效率更高,成為廣大研究者研究基因功能的一個強大工具。293細胞的缺陷是生長過程中貼壁強度比較小。所以在實驗過程中容易流失,從而影響實驗結(jié)果。
細胞是用5型腺病毒75株系轉(zhuǎn)化,含有Ad5 E1區(qū)的人胚腎亞三倍體細胞系,是一種E1區(qū)缺陷互補細胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建而成。
現(xiàn)在國外進行STR分析,國內(nèi)很多細胞交叉污染,已不是命名的那個細胞的,要想檢測也不方便。293T是正常的人胚腎細胞,是從胚胎提取的腎細胞。你可以到ATCC的網(wǎng)站上對照圖片看,形態(tài)相差大就值得懷疑,做實驗就要謹慎了。
和HEK293是同一種細胞,它們的全稱是Human Embryonic Kidney 293 cell 即人類胚胎腎細胞。293還有一種衍生的293T細胞:293細胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株,即為293T細胞系。這使得包含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細胞系中顯著擴增,從而促進表達載體的擴增,促進蛋白的表達。
對于做分子生物學實驗的人來說,293細胞再熟悉不過了。常在文獻中看到不同的293名字,全然沒考慮過293細胞原來還是團隊作案,分身無數(shù)。